細(xì)胞植物(系)的應(yīng)用給醫(yī)學(xué)研究和測試帶來了極大的便利。然而,細(xì)胞代代相傳是有限的。長期持續(xù)的細(xì)胞不僅消耗大量的人力物力,而且細(xì)胞的生長和形態(tài)也會有一定的退化或轉(zhuǎn)化。因此,細(xì)胞失去了原有的遺傳特性,有時(shí)會因細(xì)胞污染而中斷代代,失去種子。因此,在日常工作中,經(jīng)常需要冷凍一定數(shù)量的細(xì)胞進(jìn)行替代。細(xì)胞冷凍和恢復(fù)是細(xì)胞培養(yǎng)室的常規(guī)工作和通用技術(shù)。定制液氮罐
細(xì)胞凍存簡述
目前,常用的細(xì)胞冷凍技術(shù)是液氮冷凍儲存方法,主要采用緩慢的冷凍方法,加入適量的保護(hù)劑來冷凍細(xì)胞。細(xì)胞直接冷凍,沒有任何保護(hù)劑,細(xì)胞內(nèi)外的水很快就會產(chǎn)生霜凍,從而引起一系列的不良反應(yīng)。如果細(xì)胞脫水增加局部電解質(zhì)濃度,pH值變化,部分蛋白質(zhì)因上述原因變性,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)部空間布局紊亂,溶酶體膜受損釋放溶酶體酶,破壞細(xì)胞內(nèi)成分,線粒體腫脹,功能喪失,阻礙能量消耗。細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)復(fù)合體也很容易破壞,導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性的變化和細(xì)胞內(nèi)容的丟失。如果細(xì)胞中有更多的霜凍,隨著冷凍溫度的降低,霜凍體積的膨脹會導(dǎo)致細(xì)胞核DNA空間結(jié)構(gòu)的不可逆轉(zhuǎn)損傷,導(dǎo)致細(xì)胞死亡。液氮罐
因此,細(xì)胞冷凍技術(shù)的關(guān)鍵是盡可能減少細(xì)胞中的水分,減少細(xì)胞中霜凍的形成。選擇甘油或二甲基亞砜作為保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)含量小,溶解性大,易于通過細(xì)胞,可降低冰點(diǎn),提高細(xì)胞膜對水的滲透性,對細(xì)胞無明顯毒性。慢速冷凍方法可以使細(xì)胞中的水滲出細(xì)胞,減少細(xì)胞中冰結(jié)晶的機(jī)會,從而減少霜凍對細(xì)胞的損害
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